新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南

2020-07-17

新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南
二月 21, 国家卫健委印发新型冠状病毒肺炎疫情防控预案 (第五版), 并作为附件, 发布新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南 (第五版).

新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南

为指导各级疾控部门及其他相关机构开展新型冠状病毒肺炎实验室检测工作, 本技术指南是专门制定的.
1. 标本采集和处理
1. 鼻咽拭子: 采样器轻轻支撑被采集者的头部, 一只手拿着拭子, 拭子贴在鼻孔上, 并沿着下鼻道底部慢慢向后加深. 猛烈以避免外伤流血. 当拭子尖端到达鼻咽腔后壁时, 轻轻旋转一周 (如果出现反射性咳嗽, 它应该停留一段时间), 然后慢慢取出拭子, 将拭子头浸入含有 2 到 3 毫升病毒 (也可使用等渗盐水溶液, 组织培养液或磷酸盐缓冲液), 丢弃尾巴, 并拧紧盖子.
2. 咽拭子: 被采集者先用生理盐水漱口, 取样人员将拭子放入无菌生理盐水中润湿 (禁止将拭子放入病毒保存液中，以免引起抗生素过敏), 被收集者的头稍微向上倾斜, 嘴巴张大, 和 “啊” 声音, 暴露两侧咽扁桃体, 舌根上的拭子, 至少用一点用力来回擦拭对象两侧的咽扁桃体 3 次, 然后至少 3 位于咽后壁第二, 将拭子头浸入装有 2 到 3 毫升病毒保存液 (等渗盐溶液, 也可以使用组织培养液或磷酸盐缓冲液), 丢弃尾巴, 并拧紧盖子. 咽拭子也可与鼻咽拭子置于同一管中. 3. 鼻咽提取物或呼吸道提取物: 使用连接至负压泵的收集器抽取鼻咽部的粘液或气管内的气道分泌物. 将收集器头插入鼻腔或气管, 开启负压, 旋转收集器头并缓慢退出, 收集提取的粘液, 用3ml采样液冲洗收集器一次 (您还可以使用儿科导管连接到 50 毫升注射器替代收集器).
4. 深痰: 患者深咳后需将咳出的痰液收集于装有3ml样品溶液的50ml螺旋塑料管中. 如果采样溶液中未采集到痰液, 试验前加入2~3ml采样液或加入等体积的痰液消化液.
痰液消化液储存液配方:
使用前, 将储备溶液稀释至 100 毫升去离子水. 磷酸盐缓冲液含有 1 g/L蛋白酶K也可用等体积的痰液液化.
5. 支气管灌洗液: 将收集器头插入气管 (深约30厘米) 从鼻孔或气管插口, 注射5ml生理盐水, 开启负压, 旋转收集器头并缓慢退出. 收集提取的粘液，用采样液冲洗收集器一次 (也可以用儿科导管连接50ml注射器来更换采集).
6. 肺泡灌洗液: 局部麻醉后, 将纤维支气管镜经口或鼻经咽部插入右中叶分支或左肺舌段, 并将尖端插入支气管分支开口, 并通过气管活检孔缓慢加入灭菌生理盐水, 30-50每次毫升, 总量100-250ml, 不应超过300ml.
7. 粪便标本: 取标本处理液1ml, 拿起大豆标本尺寸并将其添加到管中, 轻轻地吮吸它 3-5 次, 让它在室温下静置一段时间 10 分钟, 8000rpm 离心机 5 分钟, 吸上清液进行检测.
粪便样本处理液可自行配制: 1.211 克三羟色胺, 8.5 克氯化钠, 1.1 g 无水氯化钙或 1.47 g氯化钙含结晶水, 溶解于 800 毫升去离子水, 并调节pH值 7.5 用浓盐酸 , 用去离子水定容至1000ml.
粪便悬浮液也可以通过使用 HANK’S 溶液或其他等渗盐水溶液溶解粪便样本来制备, 组织培养液或磷酸盐缓冲液. 如果患者有腹泻症状, 离开 3 到 5 毫升粪便样本, 轻轻移液并混合, 离心机在 8000 转速为 5 分钟, 吸取上清液备用.
8. 肛拭子: 将消毒棉签轻轻插入肛门3~5cm, 然后轻轻旋转并拉出, 立即放入盛有3~5ml病毒保存液的15ml外螺帽采样管中, 丢弃尾巴, 并拧紧管盖.
9. 血液标本: 建议使用含有EDTA抗凝剂的真空血管采集5ml血液标本. 根据所选核酸提取试剂的类型确定用全血还是血浆提取核酸. 分离血浆, 1500-2000rpm 离心全血 10 分钟并将上清液收集在无菌螺旋盖塑料管中.
10. 血清样本: 用真空负压采血管采集5ml血液标本, 放置在室温下 30 分钟, 1500～2000rpm离心 10 分钟, 将血清收集在无菌螺旋盖塑料管中.
其他材料: 按设计要求收集.
(5) 标本包装
收藏后, 包装于生物安全二级实验室生物安全柜内.
1. 所有标本均应放置在尺寸合适、带有螺旋盖和耐冷冻垫圈的样品采集管中, 并收紧. 样品编号, 类型, 容器外部标有名称和取样日期.
2. 将密封好的标本放入密封袋中, 每袋仅限一件标本. 样品包装要求必须符合相应标准 “危险品安全航空运输技术规则”.
3. 用于外部标本的运输, 根据标本种类及A类或B类传染性物质进行三层包装.
(6) 标本保存
用于病毒分离和核酸检测的标本应尽快进行检测. 可检测的样本 24 4°C 下可保存数小时; 无法检测到的样本 24 小时应储存在-70°C或以下 (如果不- 70℃保存, 暂时存放于-20℃冰箱内). 血清可在 4°C 下保存 3 天, 低于-20°C可长期保存. 应设立专门仓库或柜台单独保存标本. 标本运输过程中避免反复冻融.
(7) 提交检验的样本
标本采集后应尽快送实验室. 如果需要长途运输, 建议使用干冰等冷藏方式保存.