PCR與PCR有什麼區別, qPCR 和 RT-PCR?

PCR 或聚合酶鏈反應, 是一種擴增感興趣基因的生物技術工具. 簡單的PCR用於基因的檢測和擴增. 有各種先進的PCR方法, 用於各種生物技術, 診斷和研究目的. qPCR 或定量 PCR 也稱為實時 PCR. qPCR 用於量化核酸. 可以在 PCR 期間監測 DNA 分子的擴增, IE. 實時. RT-PCR被稱為逆轉錄聚合酶鏈反應. 它利用這兩個過程, IE. 逆轉錄和聚合酶鏈反應. 用於檢測和測量RNA的量.

人們經常混淆術語 PCR, 逆轉錄聚合酶鏈反應, 和QPCR一樣. 但他們不一樣. 然而, 所有三種類型的核心原則保持不變. 在討論所有三個 PCR 的差異之前, 我們應該知道它們到底是什麼?

什麼是PCR?

聚合酶鍊式反應或 PCR 用於擴增或產生基因或短鏈 DNA 的多個拷貝. 它是由 Kary Mullis 發明的. 該技術是分子生物學和生物技術中非常有用的工具. 它在實驗室中用於製作數十億份 DNA 用於研究和診斷. PCR分為三個步驟: 變性, 引物退火和引物延伸.

它需要兩組與 DNA 模板兩端互補的引物和一種耐熱的 DNA 聚合酶. 聚合酶循環反復重復以獲得 DNA 片段的多個拷貝.

聚合酶鍊式反應的三個步驟是:

變性: 在這一步, 雙鏈DNA被分離. 形成單鏈DNA.
退火: 降低反應溫度以允許引物的互補鹼基配對和退火.
延期: Taq聚合酶, 這是一種熱穩定的 DNA 聚合酶, 通常用於此目的. DNA 聚合酶將核苷酸添加到引物中並沿 5'-3' 方向延伸互補鏈.

什麼是 qPCR?

qPCR 或定量 PCR 也稱為實時 PCR. 它在 RT-qPCR 中對 DNA 或 RNA 進行了額外的定量分析.

在 qPCR 或實時 PCR 中, 顧名思義, 隨著 PCR 的進行，可以監測擴增. 在 qPCR 中, 熒光標記允許在進行聚合酶鏈反應時實時收集數據.

可以通過兩種方法在 qPCR 中實時檢測 PCR 產物:

使用非特異性熒光染料有助於檢測雙鏈 DNA. dsDNA 結合染料在 DNA 擴增時發出熒光信號, 並且在每個週期後增加. 這種方法的缺點是一次只能檢查一個靶標，因為它與所有 dsDNA 片段結合.
使用熒光標記的 DNA 探針, 這是特定於序列的. 它們可以在與其互補序列雜交後被檢測到. 由於 DNA 探針是目標特異性的, 可以同時分析許多目標.

什麼是RT-PCR?

RT-PCR 或逆轉錄 PCR 包括兩個步驟, 首先是逆轉錄過程, 第二種是通過聚合酶鍊式反應或 PCR 擴增所需的 DNA 序列. RT-PCR 用於檢測樣品中的 RNA. 可使用RT-qPCR測量​​RNA量. RT-PCR 結合 qPCR (實時定量PCR) 在病毒RNA和基因表達的定量分析中非常有用.

RT-PCR步驟與PCR相同, 額外的第一步逆轉錄. 在 RT-PCR 中, 互補DNA (cDNA) 首先使用逆轉錄酶產生 (轉播). cDNA, 如此形成, 然後用作 PCR 標準擴增過程的模板.

PCR 之間的主要區別, RT PCR 和 qPCR:

以上內容可以根據以下幾點進行總結:

• PCR 是一種簡單的技術，用於創建所需 DNA 片段的多個拷貝. 逆轉錄聚合酶鏈反應, 另一方面, 用於RNA擴增. 相反, qPCR 參與相應樣品中核酸的定量.
• PCR和RT PCR是定性技術, 但 qPCR 是一種定量技術.
• PCR 的初始模板是雙鏈 DNA, 而RT PCR只能以RNA為模板。除了這些, qPCR 具有同時使用 DNA 和 RNA 的能力.
• PCR是一種靈敏度和特異性較低的技術. 相比之下, RT PCR 和 qPCR 非常靈敏和特異.
• PCR擴增產物分辨率超低. 另一方面, RT PCR和qPCR的PCR產物分辨率更高.
• 傳統 PCR 只需要 DNA 聚合酶. 但是 RT PCR 和 qPCR 需要逆轉錄酶和 DNA 聚合酶.
• 聚合酶鏈反應, 像 RT PCR, 與熒光無關, 但qPCR主要是基於熒光原理.
• PCR和RT-PCR的結果在反應結束時得到, 但是 qPCR 以峰和圖的形式同時生成結果.