新型冠狀病毒肺炎實驗室檢測技術指南

2020-07-17

新型冠狀病毒肺炎實驗室檢測技術指南
二月 21, 國家衛健委印發新型冠狀病毒肺炎疫情防治計畫 (第五版), 並作為附件, 發布新型冠狀病毒感染的肺炎實驗室檢測技術指南 (第五版).

新型冠狀病毒肺炎實驗室檢測技術指南

為指導各級疾管部門及其他相關機構開展新型冠狀病毒肺炎實驗室檢測工作, 本技術指南是專門製定的.
1. 標本採集與處理
1. 鼻咽拭子: 採樣器輕輕支撐被採集者的頭部, 一隻手拿著拭子, 拭子貼在鼻孔上, 並沿著下鼻道底部慢慢向後加深. 猛烈以避免外傷流血. 當拭子尖端到達鼻咽腔後壁時, 輕輕旋轉一周 (如果出現反射性咳嗽, 它應該停留一段時間), 然後慢慢取出拭子, 將拭子頭浸入含有 2 至 3 毫升病毒 (也可使用等滲鹽水溶液, 組織培養液或磷酸鹽緩衝液), 丟棄尾巴, 並旋緊蓋子.
2. 咽拭子: 被採集者先用生理食鹽水漱口, 取樣人員將拭子放入無菌生理食鹽水中潤濕 (禁止將拭子放入病毒保存液中，以免引起抗生素過敏), 被收集者的頭稍微向上傾斜, 嘴巴張大, 和 “啊” 聲音, 暴露兩側咽扁桃體, 舌根上的拭子, 至少用一點用力來回擦拭對象兩側的咽扁桃體 3 次, 然後至少 3 位於咽後壁第二, 將拭子頭浸入裝有 2 至 3 毫升病毒保存液 (等滲鹽水溶液, 也可以使用組織培養液或磷酸鹽緩衝液), 丟棄尾巴, 並旋緊蓋子. 咽部拭子也可與鼻咽拭子置於同一管中. 3. 鼻咽萃取物或呼吸道萃取物: 使用連接至負壓幫浦的收集器抽取鼻咽部的黏液或氣管內的氣道分泌物. 將收集器頭插入鼻腔或氣管, 開啟負壓, 旋轉收集器頭並緩慢退出, 收集提取的黏液, 用3ml採樣液沖洗收集器一次 (您也可以使用兒科導管連接到 50 毫升注射器替代收集器).
4. 深層痰: 患者深咳後需將咳出的痰液收集於裝有3ml樣本溶液的50ml螺口塑膠管中. 如果採樣溶液中未採集到痰液, 試驗前加入2~3ml採樣液或加入等體積痰液消化液.
痰液消化液儲存液配方:
使用前, 將儲備溶液稀釋至 100 毫升去離子水. 磷酸鹽緩衝液含有 1 g/L蛋白酶K也可用等體積的痰液液化.
5. 支氣管灌洗液: 將收集器頭插入氣管 (深約30厘米) 從鼻孔或氣管插口, 注射5ml生理食鹽水, 開啟負壓, 旋轉收集器頭並緩慢退出. 收集提取的黏液，用採樣液沖洗收集器一次 (也可以用兒科導管連接50ml注射器來更換採集).
6. 肺泡灌洗液: 局部麻醉後, 將纖維支氣管鏡經口或鼻經咽部插入右中葉分支或左肺舌段, 並將尖端插入支氣管分支開口, 並透過氣管切片孔緩慢加入滅菌生理食鹽水, 30-50每次毫升, 總量100-250ml, 不應超過300ml.
7. 糞便標本: 取標本處理液1ml, 拿起大豆標本尺寸並將其添加到管中, 輕輕地吸吮它 3-5 次, 讓它在室溫下靜置一段時間 10 分鐘, 8000rpm 離心機 5 分鐘, 吸上清液進行檢測.
糞便檢體處理液可自行配製: 1.211 克三羥色胺, 8.5 克氯化鈉, 1.1 g 無水氯化鈣或 1.47 g氯化鈣含結晶水, 溶於 800 毫升去離子水, 並調節pH值 7.5 用濃鹽酸 , 用去離子水定容至1000ml.
糞便懸浮液也可以使用 HANK’S 溶液或其他等滲鹽水溶液溶解糞便樣本來製備, 組織培養液或磷酸鹽緩衝液. 如果患者有腹瀉症狀, 離開 3 至 5 毫升糞便樣本, 輕輕移液並混合, 離心機在 8000 轉速為 5 分鐘, 吸取上清液備用.
8. 肛拭子: 將消毒棉花棒輕輕插入肛門3~5cm, 然後輕輕旋轉並拉出, 立即放入盛有3~5ml病毒保存液的15ml外螺帽採樣管中, 丟棄尾巴, 並旋緊管蓋.
9. 血液標本: 建議使用含有EDTA抗凝血劑的真空血管採集5ml血液標本. 根據所選核酸萃取試劑的類型確定用全血或血漿萃取核酸. 分離血漿, 將全血以 1500-2000rpm 離心 10 分鐘並將上清液收集在無菌螺旋蓋塑膠管中.
10. 血清樣本: 用真空負壓採血管採集5ml血液標本, 放置在室溫下 30 分鐘, 1500～2000rpm離心 10 分鐘, 將血清收集在無菌螺旋蓋塑膠管中.
其他材料: 按設計要求收集.
(5) 標本包裝
收藏後, 包裝於生物安全二級實驗室生物安全櫃內.
1. 所有標本應放置在尺寸合適、帶螺帽和耐冷凍墊圈的樣品採集管中, 並收緊. 樣品編號, 類型, 容器外部標明名稱和取樣日期.
2. 將密封好的標本放入密封袋中, 每袋限一件標本. 樣品包裝要求必須符合相應標準 “危險品安全航空運輸技術規則”.
3. 用於外部標本的運輸, 依標本種類及A類或B類傳染性物質進行三層包裝.
(6) 標本保存
用於病毒分離和核酸檢測的檢體應盡快進行檢測. 可檢測的樣本 24 4°C 下可保存數小時; 無法檢測到的樣本 24 小時應儲存於-70°C或以下 (如果不- 70℃保存, 暫時存放於-20℃冰箱內). 血清可在 4°C 保存 3 天, 低於-20°C可長期保存. 應設立專門倉庫或檯面單獨保存標本. 標本運送過程中避免反覆凍融.
(7) 提交檢驗的樣本
標本採集後應盡快送實驗室. 如果需要長途運輸, 建議使用乾冰等冷藏方式保存.