คู่มือเทคนิคการตรวจทางห้องปฏิบัติการสำหรับโรคปอดอักเสบจากไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่
เมื่อเดือนกุมภาพันธ์ 21, คณะกรรมการสุขภาพแห่งชาติได้ออกแผนการป้องกันและควบคุมโรคปอดอักเสบจากเชื้อไวรัสโคโรนาฉบับใหม่ (ฉบับที่ห้า), และเป็นภาคผนวก, เผยแพร่แนวปฏิบัติทางเทคนิคการทดสอบโรคปอดอักเสบจากการติดเชื้อไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ (ฉบับที่ห้า).
คู่มือเทคนิคการตรวจทางห้องปฏิบัติการสำหรับโรคปอดอักเสบจากไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่
เพื่อเป็นแนวทางให้หน่วยงานควบคุมโรคทุกระดับและสถาบันอื่น ๆ ที่เกี่ยวข้องดำเนินการตรวจทางห้องปฏิบัติการเกี่ยวกับโรคปอดอักเสบจากเชื้อไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่, คู่มือทางเทคนิคนี้จัดทำขึ้นเป็นพิเศษ.
1. การรวบรวมและประมวลผลตัวอย่าง
1. ผ้าเช็ดโพรงจมูก: เครื่องเก็บตัวอย่างจะค่อยๆ รองรับศีรษะของผู้ถูกเก็บตัวอย่าง, ถือไม้กวาดในมือข้างหนึ่ง, ไม้กวาดติดอยู่ที่รูจมูก, และค่อย ๆ ลึกลงไปทางด้านล่างของช่องจมูกส่วนล่าง. รุนแรงเพื่อหลีกเลี่ยงการตกเลือดจากการบาดเจ็บ. เมื่อปลายไม้กวาดไปถึงผนังด้านหลังของโพรงหลังจมูก, ค่อยๆ หมุนเป็นเวลาหนึ่งสัปดาห์ (ในกรณีที่มีอาการไอแบบสะท้อน, มันควรจะอยู่สักพักหนึ่ง), แล้วค่อย ๆ ดึงสำลีออก, และจุ่มหัวไม้กวาดลงในน้ำยาถนอมอาหารที่มี 2 ถึง 3 มล. ของไวรัส (มีจำหน่ายด้วย ใช้สารละลายน้ำเกลือไอโซโทนิก, สารละลายเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อหรือสารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟต), ทิ้งหาง, และขันฝาปิดให้แน่น.
2. ไม้กวาดคอหอย: บุคคลที่เก็บรวบรวมจะบ้วนปากด้วยน้ำเกลือทางสรีรวิทยาก่อน, ผู้สุ่มตัวอย่างจะจุ่มสำลีในน้ำเกลือปลอดเชื้อเพื่อทำให้สำลีเปียก (ห้ามมิให้ใส่ไม้กวาดในน้ำยาถนอมไวรัสเพื่อหลีกเลี่ยงการแพ้ที่เกิดจากยาปฏิชีวนะ), ศีรษะของผู้รวบรวมเอียงขึ้นเล็กน้อย, ปากกว้างขึ้น, กับ “อา” เสียง, เผยให้เห็นต่อมทอนซิลคอหอยทั้งสองข้าง, ไม้กวาดบนโคนลิ้น, และเช็ดคอหอยทอนซิลทั้งสองด้านของตัวแบบโดยให้แข็งไปกลับมาเล็กน้อยอย่างน้อย 3 ครั้ง, และอย่างน้อยที่สุด 3 บนผนังด้านหลังของคอหอยที่สอง, จุ่มหัวไม้กวาดลงในหลอดที่มี 2 ถึง 3 น้ำยาถนอมไวรัส มล (สารละลายน้ำเกลือไอโซโทนิก, สามารถใช้สารละลายเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อหรือสารละลายบัฟเฟอร์ฟอสเฟตได้), ทิ้งหาง, และขันฝาปิดให้แน่น. ไม้กวาดคอหอยสามารถอยู่ในหลอดเดียวกับไม้กวาดโพรงหลังจมูกได้. 3. สารสกัดจากโพรงจมูกหรือสารสกัดจากระบบทางเดินหายใจ: ใช้ตัวสะสมที่เชื่อมต่อกับปั๊มแรงดันลบเพื่อแยกน้ำมูกออกจากช่องจมูกหรือสารคัดหลั่งของทางเดินหายใจจากหลอดลม. ใส่หัวสะสมเข้าไปในโพรงจมูกหรือหลอดลม, เปิดแรงดันลบ, หมุนหัวสะสมแล้วออกช้าๆ, รวบรวมน้ำมูกที่สกัดออกมา, และล้างตัวรวบรวมหนึ่งครั้งด้วยของเหลวเก็บตัวอย่าง 3 มล (คุณยังสามารถใช้สายสวนสำหรับเด็กเพื่อเชื่อมต่อกับหลอดฉีดยาทางเลือกขนาด 50 มล).
4. เสมหะลึก: ผู้ป่วยจะต้องเก็บเสมหะที่ไอในหลอดพลาสติกแบบสกรูขนาด 50 มล. ที่บรรจุสารละลายตัวอย่าง 3 มล. หลังจากไอลึก. หากไม่ได้เก็บเสมหะในสารละลายเก็บตัวอย่าง, เติมสารละลายสุ่มตัวอย่าง 2~3 มล. หรือเติมสารละลายการย่อยเสมหะในปริมาณเท่ากันก่อนการทดสอบ.
สูตรสารละลายกักเก็บน้ำย่อยเสมหะ:
ก่อนใช้งาน, เจือจางสารละลายสต็อกเป็น 100 มล. ด้วยน้ำปราศจากไอออน. บัฟเฟอร์ฟอสเฟตที่ประกอบด้วย 1 g/L protease K สามารถทำให้เป็นของเหลวได้ด้วยเสมหะในปริมาณที่เท่ากัน.
5. น้ำยาล้างหลอดลม: ใส่หัวสะสมเข้าไปในหลอดลม (ลึกประมาณ 30 ซม) จากรูจมูกหรือเบ้าหลอดลม, ฉีดน้ำเกลือ 5 มล, เปิดแรงดันลบ, หมุนหัวสะสมแล้วถอนออกช้าๆ. เก็บเมือกที่แยกออกมาแล้วล้างตัวเก็บตัวอย่างหนึ่งครั้งด้วยของเหลวสำหรับเก็บตัวอย่าง (คุณยังสามารถใช้สายสวนสำหรับเด็กเพื่อเชื่อมต่อกับกระบอกฉีดยาขนาด 50 มล. เพื่อแทนที่คอลเลกชัน).
6. น้ำยาล้างถุงลม: หลังจากการดมยาสลบ, ใส่หลอดลมใยแก้วนำแสงทางปากหรือจมูกผ่านทางคอหอยแล้วสอดเข้าไปในกิ่งของกลีบกลางขวาหรือส่วนลิ้นปอดซ้าย, และสอดปลายเข้าไปในช่องเปิดของหลอดลม, และค่อยๆ เพิ่มสรีรวิทยาของการฆ่าเชื้อผ่านทางช่องตรวจชิ้นเนื้อหลอดลม น้ำเกลือ, 30-50มล. ในแต่ละครั้ง, ปริมาณรวมคือ 100-250ml, ไม่ควรเกิน 300มล.
7. ตัวอย่างอุจจาระ: ใช้สารละลายการประมวลผลตัวอย่าง 1 มล, หยิบขนาดตัวอย่างถั่วเหลืองแล้วเติมลงในหลอด, ค่อยๆ ดูดมันเพื่อ 3-5 ครั้ง, ปล่อยให้มันยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาที, ปั่นแยกที่ 8000 รอบต่อนาทีสำหรับ 5 นาที, และดูดส่วนเหนือตะกอนเพื่อตรวจจับ.
คุณสามารถเตรียมสารละลายสำหรับการรักษาตัวอย่างอุจจาระได้ด้วยตัวเอง: 1.211 ก. ทริส, 8.5 กรัม โซเดียมคลอไรด์, 1.1 กรัม แคลเซียมคลอไรด์ปราศจากน้ำ หรือ 1.47 กรัม แคลเซียมคลอไรด์ที่มีน้ำคริสตัล, ละลายใน 800 มล. น้ำปราศจากไอออน, และปรับเป็น pH 7.5 ด้วยกรดไฮโดรคลอริกเข้มข้น , เติมน้ำปราศจากไอออนได้มากถึง 1,000 มล.
สารแขวนลอยอุจจาระสามารถเตรียมได้โดยการละลายตัวอย่างอุจจาระโดยใช้สารละลาย HANK'S หรือสารละลายน้ำเกลือไอโซโทนิกอื่นๆ, สารละลายเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อหรือบัฟเฟอร์ฟอสเฟต. หากผู้ป่วยมีอาการท้องเสีย, ออกจาก 3 ถึง 5 มล. ของตัวอย่างอุจจาระ, ปิเปตเบา ๆ และผสม, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 8000 รอบต่อนาทีสำหรับ 5 นาที, และดึงส่วนเหนือตะกอนมาใช้งาน.
8. ไม้กวาดทางทวารหนัก: ค่อยๆ ใส่สำลีปลอดเชื้อเข้าไปในทวารหนักประมาณ 3~5 ซม, จากนั้นค่อย ๆ หมุนและดึงออก, ใส่ลงในหลอดเก็บตัวอย่างแบบฝาเกลียวขนาด 15 มล. ทันที ซึ่งมีสารละลายสำหรับเก็บรักษาไวรัสขนาด 3~5 มล., ทิ้งหาง, และขันฝาครอบท่อให้แน่น.
9. ตัวอย่างเลือด: ขอแนะนำให้ใช้หลอดเลือดสุญญากาศที่มีสารต้านการแข็งตัวของเลือด EDTA เพื่อเก็บตัวอย่างเลือดจำนวน 5 มิลลิลิตร. พิจารณาการสกัดกรดนิวคลีอิกด้วยเลือดครบส่วนหรือพลาสมาตามชนิดของรีเอเจนต์การสกัดกรดนิวคลีอิกที่เลือก. เพื่อแยกพลาสมา, ปั่นแยกเลือดครบส่วนด้วยความเร็ว 1500-2000 รอบต่อนาที 10 นาทีและเก็บส่วนเหนือตะกอนไว้ในหลอดพลาสติกฝาเกลียวที่ปลอดเชื้อ.
10. ตัวอย่างเซรั่ม: เก็บตัวอย่างเลือด 5 มล. ด้วยหลอดเก็บเลือดแรงดันลบแบบสุญญากาศ, ปล่อยให้ยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที, เครื่องหมุนเหวี่ยงที่ 1500~2000rpm สำหรับ 10 นาที, เก็บซีรั่มในหลอดพลาสติกฝาเกลียวที่ปลอดเชื้อ.
วัสดุอื่นๆ: รวบรวมตามความต้องการของการออกแบบ.
(5) การบรรจุตัวอย่าง
หลังจากรวบรวม, โดยจะบรรจุในตู้ความปลอดภัยทางชีวภาพของห้องปฏิบัติการรองด้านความปลอดภัยทางชีวภาพ.
1. ควรวางชิ้นงานทดสอบทั้งหมดไว้ในหลอดเก็บตัวอย่างที่มีขนาดเหมาะสมพร้อมฝาเกลียวและปะเก็นที่ทนทานต่อการแช่แข็ง, และกระชับขึ้น. หมายเลขตัวอย่าง, พิมพ์, ชื่อและวันที่เก็บตัวอย่างระบุไว้ที่ด้านนอกภาชนะ.
2. ใส่ตัวอย่างที่ปิดผนึกไว้ในถุงที่ปิดสนิท, แต่ละถุงจำกัดเพียงหนึ่งตัวอย่าง. ข้อกำหนดบรรจุภัณฑ์ตัวอย่างต้องเป็นไปตามมาตรฐานที่เกี่ยวข้องใน “กฎทางเทคนิคสำหรับการขนส่งสินค้าอันตรายทางอากาศอย่างปลอดภัย”.
3. สำหรับการขนส่งสิ่งส่งตรวจภายนอก, บรรจุภัณฑ์สามชั้นจะต้องดำเนินการตามประเภทของสิ่งส่งตรวจและสารติดเชื้อประเภท A หรือ B.
(6) การเก็บรักษาตัวอย่าง
ตัวอย่างที่ใช้ในการแยกไวรัสและการทดสอบกรดนิวคลีอิกควรได้รับการทดสอบโดยเร็วที่สุด. ตัวอย่างที่สามารถตรวจจับได้ภายใน 24 ชั่วโมงสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4°C; ตัวอย่างที่ไม่สามารถตรวจพบภายในได้ 24 ชั่วโมงควรเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -70°C หรือต่ำกว่า (ถ้าไม่- เก็บไว้ที่ 70 ℃, เก็บไว้ในตู้เย็นชั่วคราวที่อุณหภูมิ -20 ℃). เซรั่มสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4°C เป็นเวลา 3 วัน, และต่ำกว่า -20°C เพื่อการเก็บรักษาในระยะยาว. ควรจัดตั้งโกดังหรือเคาน์เตอร์พิเศษเพื่อเก็บรักษาตัวอย่างแยกจากกัน. หลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำๆ ในระหว่างการขนส่งตัวอย่าง.
(7) ตัวอย่างที่ส่งไปตรวจสอบ
ควรส่งตัวอย่างไปที่ห้องปฏิบัติการโดยเร็วที่สุดหลังการเก็บตัวอย่าง. หากจำเป็นต้องขนส่งทางไกล, ขอแนะนำให้ใช้น้ำแข็งแห้งและวิธีการแช่เย็นอื่นๆ เพื่อการเก็บรักษา.
ผลการทดสอบกรดนิวคลีอิกที่เป็นลบไม่สามารถตัดทอนการติดเชื้อไวรัสโคโรนาสายพันธุ์ใหม่ได้. จำเป็นต้องยกเว้นปัจจัยที่อาจทำให้เกิดผลลบลวง, รวมทั้ง: คุณภาพตัวอย่างไม่ดี, เช่น ตัวอย่างทางเดินหายใจจากคอหอย, เป็นต้น; เก็บตัวอย่างเร็วเกินไปหรือช้าเกินไป; จัดเก็บและขนส่งไม่ถูกต้อง และแปรรูปตัวอย่าง; สาเหตุของการมีอยู่ของเทคโนโลยีนั้นเอง, เช่น การกลายพันธุ์ของไวรัส, การยับยั้ง PCR, » Swabs ไนล่อนที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วทิ้งสำหรับการทดสอบ COVID-19.
ผู้ผลิตไม้กวาดแห่
