Um guia para técnicas de testes laboratoriais para pneumonia por novo coronavírus

Um guia para técnicas de testes laboratoriais para pneumonia por novo coronavírus
Em fevereiro 21, a Comissão Nacional de Saúde emitiu um novo plano de prevenção e controle da pneumonia por coronavírus (quinta edição), e como anexo, lançou uma nova diretriz técnica para testes laboratoriais de pneumonia por infecção por coronavírus (quinta edição).

Um guia para técnicas de testes laboratoriais para pneumonia por novo coronavírus

A fim de orientar os departamentos de controle de doenças em todos os níveis e outras instituições relevantes a realizar testes laboratoriais de pneumonia pelo novo coronavírus, este guia técnico foi especialmente formulado.
1. Coleta e processamento de amostras
1. Esfregaços nasofaríngeos: o amostrador apoia suavemente a cabeça da pessoa que está sendo coletada, segura o cotonete com uma mão, o cotonete está preso à narina, e lentamente se aprofunda para trás ao longo da parte inferior do canal nasal inferior. Feroz para evitar sangramento por trauma. Quando a ponta do swab atinge a parede posterior da cavidade nasofaríngea, gire suavemente por uma semana (em caso de tosse reflexa, deve ficar por um tempo), em seguida, retire lentamente o cotonete, e mergulhe a cabeça do cotonete na solução de preservação contendo 2 para 3 ml de vírus (também disponível Use solução salina isotônica, solução de cultura de tecidos ou solução tampão fosfato), descarte a cauda, e aperte a tampa.
2. swab faríngeo: a pessoa coletada gargareja primeiro com soro fisiológico, o responsável pela amostragem coloca o cotonete em solução salina normal estéril para umedecê-lo (é proibido colocar o cotonete na solução de preservação de vírus para evitar alergia causada por antibióticos), a cabeça da pessoa coletada Ligeiramente inclinada para cima, boca alargada, com “ah” sons, expondo as tonsilas faríngeas em ambos os lados, o cotonete sobre a base da língua, e limpar as tonsilas faríngeas em ambos os lados do sujeito com um pouco de força para frente e para trás, pelo menos 3 vezes, e então pelo menos 3 na parede posterior da faringe Segundo, mergulhe a cabeça do cotonete em um tubo contendo 2 para 3 ml de solução de preservação de vírus (solução salina isotônica, solução de cultura de tecidos ou solução tampão fosfato também pode ser usada), descarte a cauda, e aperte a tampa. O esfregaço faríngeo também pode ser colocado no mesmo tubo que o esfregaço nasofaríngeo. 3. Extrato nasofaríngeo ou extrato do trato respiratório: Use um coletor conectado a uma bomba de pressão negativa para extrair muco da nasofaringe ou secreções das vias aéreas da traqueia. Insira a cabeça do coletor na cavidade nasal ou traquéia, ligue a pressão negativa, gire a cabeça do coletor e saia lentamente, coletar o muco extraído, e enxágue o coletor uma vez com 3ml de líquido de amostragem (você também pode usar um cateter pediátrico para conectar a uma seringa de 50ml Coletor alternativo).
4. Expectoração profunda: O paciente deve coletar o escarro tossido em um tubo plástico de rosca de 50ml contendo 3ml da solução de amostra após tosse profunda. Se o escarro não for coletado na solução de amostragem, adicione 2 a 3 ml da solução de amostragem ou adicione um volume igual de solução de digestão de escarro antes do teste.
Fórmula de solução de armazenamento de fluido digestivo de expectoração:
Antes de usar, diluir a solução estoque para 100 ml com água desionizada. Tampão fosfato contendo 1 g/L de proteinase K também pode ser liquefeita com igual volume de escarro.
5. Líquido de lavagem brônquica: Insira a cabeça do coletor na traqueia (cerca de 30 cm de profundidade) da narina ou cavidade traqueal, injetar 5ml de soro fisiológico, ligue a pressão negativa, gire a cabeça do coletor e retire lentamente. Colete o muco extraído e enxágue o coletor uma vez com o líquido de amostragem (você também pode usar um cateter pediátrico para conectar a uma seringa de 50ml para substituir a coleta).
6. Líquido de lavagem alveolar: após anestesia local, insira o broncoscópio de fibra óptica pela boca ou nariz através da faringe e insira-o no ramo do lobo médio direito ou no segmento da língua do pulmão esquerdo, e encaixe a ponta na abertura do ramo brônquico, e adicione lentamente a fisiologia de esterilização através do orifício da biópsia traqueal Água salgada, 30-50ml de cada vez, a quantidade total é 100-250ml, não deve exceder 300ml.
7. Amostras fecais: Pegue 1ml da solução de processamento de amostras, pegue o tamanho da amostra de soja e adicione-o ao tubo, chupe suavemente para 3-5 vezes, deixe repousar em temperatura ambiente por 10 minutos, centrífuga a 8.000 rpm para 5 minutos, e sugar o sobrenadante para detecção.
A solução de tratamento de amostras de fezes pode ser preparada por você mesmo: 1.211 g Tris, 8.5 g cloreto de sódio, 1.1 g cloreto de cálcio anidro ou 1.47 g cloreto de cálcio contendo água cristalina, dissolvido em 800 ml de água deionizada, e ajustado ao pH 7.5 com ácido clorídrico concentrado , Completar até 1000ml com água deionizada.
As suspensões de fezes também podem ser preparadas dissolvendo amostras de fezes usando solução de HANK ou outra solução salina isotônica., solução de cultura de tecidos ou tampão fosfato. Se o paciente apresentar sintomas de diarreia, deixar 3 para 5 ml da amostra de fezes, pipete suavemente e misture, centrifugar em 8000 rpm para 5 minutos, e desenhe o sobrenadante para uso.
8. swab anal: insira suavemente um cotonete estéril no ânus 3 ~ 5 cm, em seguida, gire suavemente e puxe-o para fora, coloque-o imediatamente em um tubo de amostragem com tampa de rosca externa de 15 ml contendo 3 a 5 ml de solução de preservação de vírus, descarte a cauda, e aperte a tampa do tubo.
9. Amostras de sangue: Recomenda-se a utilização de vasos sanguíneos a vácuo contendo anticoagulante EDTA para coletar 5ml de amostras de sangue. Determinar a extração de ácido nucleico com sangue total ou plasma de acordo com o tipo de reagente de extração de ácido nucleico selecionado. Para separar o plasma, centrifugar o sangue total a 1500-2000 rpm para 10 minutos e coletar o sobrenadante em um tubo plástico estéril com tampa de rosca.
10. Amostra de soro: Colete 5ml de amostra de sangue com tubo de coleta de sangue com pressão negativa a vácuo, deixe descansar em temperatura ambiente por 30 minutos, centrífuga a 1500~2000rpm para 10 minutos, coletar soro em tubo plástico estéril com tampa de rosca.
Outros materiais: Colete de acordo com os requisitos do projeto.
(5) Embalagem de amostras
Depois da coleta, será embalado na cabine de biossegurança do laboratório secundário de biossegurança.
1. Todas as amostras devem ser colocadas em um tubo de coleta de amostra de tamanho adequado, com tampa de rosca e gaxeta resistente ao congelamento., e apertou. O número da amostra, tipo, o nome e a data da amostragem estão indicados na parte externa do recipiente.
2. Coloque as amostras seladas em um saco selado, cada saco é limitado a uma amostra. Os requisitos de embalagem da amostra devem atender aos padrões correspondentes no “Normas Técnicas para o Transporte Seguro de Mercadorias Perigosas por Via Aérea”.
3. Para o transporte de amostras externas, o acondicionamento em três camadas deverá ser realizado de acordo com o tipo de amostras e substâncias infecciosas da classe A ou B.
(6) Preservação de espécimes
As amostras utilizadas para isolamento de vírus e testes de ácido nucleico devem ser testadas o mais rápido possível. Espécimes que podem ser detectados dentro 24 horas pode ser armazenado a 4°C; amostras que não podem ser detectadas dentro 24 horas devem ser armazenados a -70°C ou menos (se não- Armazenado a 70°C, armazenado temporariamente na geladeira a -20 ℃). O soro pode ser armazenado a 4°C por 3 dias, e abaixo de -20°C para armazenamento a longo prazo. Armazéns ou balcões especiais devem ser criados para preservar as amostras separadamente. Evite congelamentos e descongelamentos repetidos durante o transporte de amostras.
(7) Amostras enviadas para inspeção
As amostras devem ser enviadas ao laboratório o mais rápido possível após a coleta. Se for necessário transporte de longa distância, recomenda-se o uso de gelo seco e outros métodos de refrigeração para preservação.

Resultados negativos do teste de ácido nucleico não podem descartar nova infecção por coronavírus. Fatores que podem causar falsos negativos precisam ser excluídos, Incluindo: má qualidade da amostra, como amostras respiratórias da orofaringe, etc.; amostras coletadas muito cedo ou muito tarde; não armazenado e transportado adequadamente E processamento de amostras; razões para a existência da própria tecnologia, como mutação viral, Inibição de PCR, etc.