PCR 또는 중합효소 연쇄 반응, 관심 유전자를 증폭하는 생명 공학 도구입니다.. 단순 PCR은 유전자의 검출 및 증폭에 사용됩니다.. 다양한 고급 PCR 방법이 있습니다., 다양한 생명 공학에 사용되는, 진단 및 연구 목적. qPCR 또는 정량적 PCR은 실시간 PCR이라고도 합니다.. qPCR은 핵산을 정량화하는 데 사용됩니다.. PCR 동안 DNA 분자의 증폭을 모니터링할 수 있습니다., 즉. 실시간으로. RT-PCR은 역전사 중합 효소 연쇄 반응이라고 합니다.. 두 프로세스를 모두 활용합니다., 즉. 역전사 및 중합 효소 연쇄 반응. RNA의 양을 감지하고 측정하는 데 사용됩니다..
사람들은 종종 PCR이라는 용어를 혼동합니다., RT PCR, QPCR과 동일. 그러나 그들은 동일하지 않습니다. 하지만, 세 가지 유형 모두의 핵심 원칙은 동일하게 유지됩니다.. 세 가지 PCR 모두의 차이점으로 이동하기 전에, 우리는 그들이 실제로 무엇인지 알아야합니다?
PCR이란??
중합효소 연쇄 반응 또는 PCR은 유전자의 여러 복사본 또는 DNA의 짧은 스트레치를 증폭하거나 생성하는 데 사용됩니다.. Kary Mullis가 발명했습니다.. 이 기술은 분자 생물학 및 생명 공학 분야에서 매우 유용한 도구입니다.. 연구 및 진단을 위해 수십억 개의 DNA 사본을 만들기 위해 실험실에서 사용됩니다.. PCR에는 세 단계가 있습니다.: 변성, 프라이머 어닐링 및 프라이머 연장.
DNA 주형의 양 말단에 상보적인 두 세트의 프라이머와 내열성 DNA 중합효소가 필요합니다.. DNA 세그먼트의 여러 복사본을 얻기 위해 중합효소 주기가 반복적으로 반복됩니다..
중합 효소 연쇄 반응의 세 단계는 다음과 같습니다.:
변성: 이 단계에서, 이중 가닥 DNA가 분리됩니다.. 단일 가닥의 DNA가 형성됨.
가열 냉각: 프라이머의 상보적 염기쌍 형성 및 어닐링이 가능하도록 반응 온도를 낮춥니다..
확대: Taq 중합효소, 열에 안정한 DNA 중합효소입니다., 이 목적을 위해 일반적으로 사용됩니다. DNA 중합효소는 프라이머에 뉴클레오티드를 추가하고 상보적 가닥을 5'-3' 방향으로 확장합니다..
qPCR이란 무엇입니까??
qPCR 또는 정량적 PCR은 실시간 PCR이라고도 합니다.. RT-qPCR에서 DNA 또는 RNA의 추가 정량 분석을 제공합니다..
qPCR 또는 실시간 PCR에서, 이름에서 알 수 있듯이, PCR이 진행됨에 따라 증폭을 모니터링할 수 있습니다.. qPCR에서, 형광 라벨링은 중합효소 연쇄 반응이 수행됨에 따라 실시간 데이터 수집이 가능합니다..
두 가지 방법으로 qPCR에서 PCR product를 실시간으로 검출할 수 있습니다.:
비특이적 형광 염료를 사용하면 이중 가닥 DNA 검출에 도움이 됩니다.. dsDNA 결합 염료는 DNA가 증폭됨에 따라 형광 신호를 제공합니다., 각 주기마다 증가합니다.. 이 방법의 단점은 모든 dsDNA 조각에 결합하기 때문에 한 번에 하나의 표적만 검사할 수 있다는 것입니다..
형광 표지 DNA 프로브 사용, 시퀀스 특정. 상보적 서열과 혼성화한 후 검출할 수 있습니다.. DNA 프로브는 특정 표적이기 때문에, 많은 대상을 동시에 분석할 수 있습니다..
RT-PCR이란??
RT-PCR 또는 역전사 PCR은 두 단계로 구성됩니다., 첫 번째는 역전사 과정입니다., 두 번째는 중합 효소 연쇄 반응 또는 PCR에 의한 원하는 DNA 서열의 증폭입니다.. RT-PCR은 샘플에서 RNA를 검출하는 데 사용됩니다.. RT-qPCR을 이용하여 RNA의 양을 측정할 수 있습니다.. qPCR과 결합된 RT-PCR (RT-정량 PCR) 바이러스 RNA 및 유전자 발현의 정량 분석에 매우 유용합니다..
RT-PCR의 단계는 PCR과 동일합니다., 역전사의 첫 번째 추가 단계. RT-PCR에서, 상보적 DNA (cDNA) 역전사 효소를 사용하여 먼저 생산됩니다. (RT). cDNA, 이렇게 형성된, 그런 다음 PCR에 의한 표준 증폭 과정을 위한 템플릿으로 사용됩니다..
PCR의 주요 차이점, RT PCR 및 qPCR:
위의 내용은 다음과 같이 요약할 수 있습니다.:
