PCR またはポリメラーゼ連鎖反応, 目的の遺伝子を増幅するためのバイオテクノロジーツールです. 遺伝子の検出と増幅にはシンプルな PCR が使用されます。. PCRにはさまざまな高度な方法があります, さまざまなバイオテクノロジーに使用されています, 診断および研究目的. qPCR または定量的 PCR は、リアルタイム PCR とも呼ばれます。. qPCR は、核酸を定量化するために使用されます。. PCR 中に DNA 分子の増幅を監視できます。, すなわち. リアルタイムで. RT-PCR は、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応と呼ばれます。. 両方のプロセスを利用します, すなわち. 逆転写とポリメラーゼ連鎖反応. RNAの量を検出および測定するために使用されます.
PCRという用語はよく混同されます, RT PCR, と同じ QPCR. しかし、それらは同じではありません. しかし, 3つのタイプすべてのコア原則は同じままです. 3 つすべての PCR の違いに進む前に, 私たちは彼らが実際に何であるかを知るべきです?
PCRとは?
ポリメラーゼ連鎖反応または PCR は、遺伝子の複数のコピーまたは短い DNA ストレッチを増幅または生成するために使用されます。. キャリー・マリスによって発明されました。. この技術は、分子生物学およびバイオテクノロジーにおいて非常に有用なツールです。. 研究や診断のために数十億の DNA コピーを作成するためにラボで使用されています。. PCRには3つのステップがあります: 変性, プライマーのアニーリングとプライマーの伸長.
DNA テンプレートの両端に相補的な 2 セットのプライマーと耐熱性 DNA ポリメラーゼが必要です。. ポリメラーゼサイクルが繰り返されて、DNA セグメントの複数のコピーが得られます。.
ポリメラーゼ連鎖反応の 3 つのステップは次のとおりです。:
変性: このステップでは, 二本鎖DNAが分離される. DNAの一本鎖が形成される.
アニーリング: 反応温度を下げて、相補的な塩基対形成とプライマーのアニーリングを可能にします。.
拡大: Taq ポリメラーゼ, これは熱安定性DNAポリメラーゼです, この目的のために一般的に使用されます. DNA ポリメラーゼはプライマーにヌクレオチドを付加し、相補鎖を 5'-3' 方向に伸長します。.
qPCRとは?
qPCR または定量的 PCR は、リアルタイム PCR とも呼ばれます。. RT-qPCR で DNA または RNA の追加の定量分析を提供します。.
qPCR またはリアルタイム PCR, 名前が示すように, PCRの進行に合わせて増幅を監視できます. qPCRでは, 蛍光標識により、ポリメラーゼ連鎖反応が実行されるときにリアルタイムのデータ収集が可能になります.
PCR産物は、2つの方法でqPCRでリアルタイムに検出できます:
非特異的な蛍光色素を使用すると、二本鎖 DNA の検出に役立ちます. dsDNA結合色素は、DNAが増幅されると蛍光シグナルを発します, そしてそれは各サイクルの後に増加します. この方法の欠点は、すべての dsDNA フラグメントに結合するため、一度に 1 つのターゲットしか検査できないことです。.
蛍光標識 DNA プローブの使用, これは配列特異的です. それらは、その相補配列とのハイブリダイゼーション後に検出できます. DNAプローブは標的特異的であるため, 多くのターゲットを同時に分析可能.
RT-PCRとは?
RT-PCR または逆転写 PCR は 2 つのステップで構成されます, 1つ目は逆転写プロセスです, 2 つ目は、ポリメラーゼ連鎖反応または PCR による目的の DNA 配列の増幅です。. RT-PCR は、サンプル中の RNA を検出するために使用されます。. RT-qPCR を使用して RNA の量を測定することができます。. RT-PCR と qPCR の組み合わせ (RT-qPCR) ウイルス RNA や遺伝子発現の定量分析に非常に有用です。.
RT-PCR の手順は PCR と同じです。, 逆転写の追加の最初のステップで. RT-PCRで, 相補的DNA (cDNA) 逆転写酵素を使用して最初に生成されます (RT). cDNA, こうして形成された, その後、PCR による標準的な増幅プロセスのテンプレートとして使用されます.
PCR 間の主な違い, RT PCR および qPCR:
以上の内容は、次の点に基づいて要約することができます。:
