Una guida alle tecniche di analisi di laboratorio per la polmonite da nuovo coronavirus

Una guida alle tecniche di analisi di laboratorio per la polmonite da nuovo coronavirus
A febbraio 21, la Commissione sanitaria nazionale ha pubblicato un nuovo piano di prevenzione e controllo della polmonite da coronavirus (quinta edizione), e come allegato, ha pubblicato un nuovo laboratorio per testare la polmonite da infezione da coronavirus linee guida tecniche (quinta edizione).

Una guida alle tecniche di analisi di laboratorio per la polmonite da nuovo coronavirus

Al fine di guidare i dipartimenti di controllo delle malattie a tutti i livelli e altre istituzioni pertinenti per effettuare test di laboratorio di nuova polmonite da coronavirus, Questa guida tecnica è appositamente formulata.
1. Raccolta ed elaborazione dei campioni
1. Tamponi rinofaringei: Il campionatore supporta delicatamente il capo della persona che viene raccolta, Tiene il tampone in una mano, Il tampone è attaccato alla narice, e si approfondisce lentamente lungo il fondo del canale nasale inferiore. Feroce per evitare sanguinamento dal trauma. Quando la punta del tampone raggiunge la parete posteriore della cavità rinofaringea, ruotalo delicatamente per una settimana (In caso di tosse riflessa, Dovrebbe rimanere per un po '), Quindi elimina lentamente il tampone, e immergere la testa del tampone nella soluzione di conservazione contenente 2 A 3 ml di virus (disponibile anche utilizzare soluzione salina isotonica, soluzione di coltura tissutale o soluzione tampone fosfato), scartare la coda, e stringere il cappuccio.
2. Tampone faringea: La persona raccolta gargone con soluzione salina fisiologica prima, La persona di campionamento mette il tampone in soluzione salina normale sterile per inumidire (È vietato mettere il tampone nella soluzione di conservazione del virus per evitare l'allergia causata dagli antibiotici), La testa della persona raccolta leggermente inclusa, bocca allargata, con “ah” suoni, esponendo le tonsille faringee su entrambi i lati, il tampone sulla base della lingua, e asciugando le tonsille faringee su entrambi i lati del soggetto con un po 'duro avanti e indietro 3 volte, E poi almeno 3 sulla parete posteriore della faringe secondo, immergere la testa di tampone in un tubo contenente 2 A 3 ml di soluzione di conservazione del virus (soluzione salina isotonica, È possibile utilizzare anche la soluzione di coltura di tessuto o la soluzione tampone fosfato), scartare la coda, e stringere il cappuccio. Il tampone faringeo può anche essere posizionato nello stesso tubo del tampone rinofaringeo. 3. Estratto di rinofaringeo o estratto di tratto respiratorio: Utilizzare un collettore collegato a una pompa di pressione negativa per estrarre il muco dalla aselezione di rinofaringe o delle vie aeree dalla trachea. Inserire la testa del collettore nella cavità nasale o trachea, Accendi la pressione negativa, ruotare la testa del collettore e uscire lentamente, Raccogli il muco estratto, e sciacquare il collettore una volta con 3 ml di liquido di campionamento (È inoltre possibile utilizzare un catetere pediatrico per connettersi a un collettore alternativo da 50 ml di siringa).
4. Espettorato profondo: Il paziente è tenuto a raccogliere l'impettorato tosse in un tubo di plastica a vite da 50 ml contenente 3 ml della soluzione di campionamento dopo tosse profonda. Se l'espettorato non viene raccolto nella soluzione di campionamento, Aggiungi 2 ~ 3 ml della soluzione di campionamento o aggiungi un volume uguale di soluzione di digestione dell'espettorato prima del test.
Formula di soluzione di stoccaggio fluido digestivo di espettorato:
Prima dell'uso, diluire la soluzione madre a 100 ml con acqua deionizzata. Tampone fosfato contenente 1 La proteinasi G/L può anche essere liquefatta con un volume uguale di espettorato.
5. Fluido di lavaggio bronchiale: Inserire la testa del collettore nella trachea (Circa 30 cm di profondità) Dalla presa di narici o tracheali, iniettare 5 ml di soluzione salina, Accendi la pressione negativa, ruotare la testa del collettore e ritirarsi lentamente. Raccogli il muco estratto e sciacquare il collettore una volta con il liquido di campionamento (È inoltre possibile utilizzare un catetere pediatrico per connettersi a una siringa da 50 ml per sostituire la raccolta).
6. Fluido di lavaggio alveolare: Dopo l'anestesia locale, Inserire il broncoscopio fitro, e montare la punta nell'apertura del ramo bronchiale, e aggiungere lentamente la fisiologia della sterilizzazione attraverso l'acqua salata del foro biopsia tracheale, 30-50ml ogni volta, L'importo totale è di 100-250 ml, non dovrebbe superare i 300 ml.
7. Esemplari fecali: Prendi 1 ml della soluzione di elaborazione del campione, Raccogli le dimensioni del campione di soia e aggiungila al tubo, Succhialo delicatamente per 3-5 volte, Lascialo stare a temperatura ambiente per 10 minuti, centrifuga a 8000 giri / min per 5 minuti, e succhiare il surnatante per il rilevamento.
La soluzione di trattamento del campione di feci può essere preparata da solo: 1.211 G Tris, 8.5 g di sodio cloruro, 1.1 g anidro cloruro di calcio o 1.47 G cloruro di calcio contenente acqua di cristallo, sciolto in 800 Ml Acqua deionizzata, e regolato a pH 7.5 con acido cloridrico concentrato , Crea fino a 1000 ml con acqua deionizzata.
Le sospensioni delle feci possono anche essere preparate dissolvendo i campioni di feci usando la soluzione di Hank o altra soluzione salina isotonica, soluzione di coltura tissutale o tampone fosfato. Se il paziente ha sintomi di diarrea, Partire 3 A 5 ml del campione di feci, Pipetta e mescola delicatamente, centrifuga a 8000 RPM per 5 minuti, e disegna il surnatante per l'uso.
8. Tampone anale: Inserire delicatamente un tampone di cotone sterile nell'ano 3 ~ 5 cm, Quindi ruota delicatamente e tiralo fuori, Mettilo immediatamente in un tubo di campionamento del tappo a vite esterno da 15 ml contenente 3 ~ 5 ml di conservazione del virus, scartare la coda, e serrare il coperchio del tubo.
9. Campioni di sangue: Si raccomanda di utilizzare i vasi sanguigni sottovuoto contenenti anticoagulanti EDTA per raccogliere 5 ml di campioni di sangue. Determinare l'estrazione di acido nucleico con sangue intero o plasma in base al tipo di reagente di estrazione dell'acido nucleico selezionato. Per separare il plasma, centrifuga l'intero sangue a 1500-2000 giri / min per 10 minuti e raccogli il surnatante in un tubo di plastica a vite sterile.
10. Campione sierico: Raccogli 5 ml di campione di sangue con tubo di raccolta del sangue a pressione negativa sotto vuoto, Lasciare riposare a temperatura ambiente per 30 minuti, centrifuga a 1500 ～ 2000 giri / min per 10 minuti, Raccogli il siero in tubo di plastica a vite sterili.
Altri materiali: Raccogli i requisiti di progettazione.
(5) Imballaggio di esemplari
Dopo la collezione, Sarà ricco nel gabinetto della biosicurezza del laboratorio secondario della biosicurezza.
1. Tutti i campioni devono essere posizionati in un tubo di raccolta del campione di dimensioni adeguate con un tappo a vite e una guarnizione resistente al congelamento, e serrato. Il numero di campione, tipo, il nome e la data di campionamento sono indicati all'esterno del contenitore.
2. Metti gli esemplari sigillati in una borsa sigillata, Ogni borsa è limitata a un campione. I requisiti di packaging del campione devono soddisfare gli standard corrispondenti in “Regole tecniche per il trasporto sicuro di merci pericolose per via aerea”.
3. Per il trasporto di campioni esterni, L'imballaggio a tre strati deve essere eseguito in base al tipo di campioni e alle sostanze infettive della classe A o B.
(6) Conservazione di esemplari
I campioni utilizzati per l'isolamento del virus e i test di acido nucleico dovrebbero essere testati il ​​prima possibile. Campioni che possono essere rilevati all'interno 24 Le ore possono essere conservate a 4 ° C; campioni che non possono essere rilevati all'interno 24 Le ore devono essere conservate a -70 ° C o inferiore (se non- Conservato a 70 ℃, Temporaneamente immagazzinato in frigorifero a -20 ℃). Il siero può essere conservato a 4 ° C per 3 giorni, e inferiore a -20 ° C per la conservazione a lungo termine. I magazzini speciali o i contatori dovrebbero essere impostati per preservare i campioni separatamente. Evita il congelamento e lo scongelamento ripetuti durante il trasporto dei campioni.
(7) Esemplari presentati per l'ispezione
Gli esemplari devono essere inviati al laboratorio il prima possibile dopo la raccolta. Se è richiesto il trasporto a lunga distanza, Si consiglia di utilizzare il ghiaccio secco e altri metodi di refrigerazione per la conservazione.

I risultati dei test di acido nucleico negativo non possono escludere l'infezione da nuovo coronavirus. I fattori che possono causare falsi negativi devono essere esclusi, Compreso: scarsa qualità del campione, come campioni respiratori dall'orofaringe, eccetera.; campioni raccolti troppo presto o troppo tardi; non adeguatamente immagazzinato, trasportato e trasformazione di campioni; ragioni per l'esistenza della tecnologia stessa, come la mutazione virale, Inibizione della PCR, eccetera.