Un guide sur les techniques de tests en laboratoire pour la pneumonie à nouveau coronavirus

Un guide sur les techniques de tests en laboratoire pour la pneumonie à nouveau coronavirus
En février 21, la Commission nationale de la santé a publié un nouveau plan de prévention et de contrôle de la pneumonie à coronavirus (cinquième édition), et en annexe, a publié de nouvelles directives techniques pour les tests de laboratoire de pneumonie d'infection à coronavirus (cinquième édition).

Un guide sur les techniques de tests en laboratoire pour la pneumonie à nouveau coronavirus

Afin de guider les services de contrôle des maladies à tous les niveaux et d'autres institutions compétentes pour effectuer des tests en laboratoire de la nouvelle pneumonie à coronavirus, ce guide technique est spécialement formulé.
1. Collecte et traitement des échantillons
1. Écouvillons nasopharyngés: l'échantillonneur soutient doucement la tête de la personne collectée, tient l'écouvillon dans une main, l'écouvillon est attaché à la narine, et s'approfondit lentement vers l'arrière le long du fond du canal nasal inférieur. Féroce pour éviter les saignements dus à un traumatisme. Lorsque la pointe de l'écouvillon atteint la paroi postérieure de la cavité nasopharyngée, faites-le pivoter doucement pendant une semaine (en cas de toux réflexe, ça devrait rester un moment), puis retirez lentement le coton-tige, et plongez la tête de l'écouvillon dans la solution de conservation contenant 2 pour 3 ml de virus (également disponible Utiliser une solution saline isotonique, solution de culture tissulaire ou solution tampon phosphate), jeter la queue, et serrez le bouchon.
2. Écouvillon pharyngé: la personne collectée se gargarise d'abord avec du sérum physiologique, la personne chargée de l'échantillonnage met l'écouvillon dans une solution saline stérile normale pour l'humidifier (il est interdit de mettre l'écouvillon dans la solution de conservation du virus pour éviter les allergies provoquées par les antibiotiques), la tête de la personne collectée Légèrement inclinée vers le haut, bouche élargie, avec “ah” des sons, exposer les amygdales pharyngées des deux côtés, le tampon sur la base de la langue, et essuyant les amygdales pharyngées des deux côtés du sujet avec un petit mouvement de va-et-vient au moins 3 fois, et puis au moins 3 sur la paroi arrière du pharynx Deuxième, plonger la tête de l'écouvillon dans un tube contenant 2 pour 3 ml de solution de conservation des virus (solution saline isotonique, une solution de culture tissulaire ou une solution tampon phosphate peut également être utilisée), jeter la queue, et serrez le bouchon. L'écouvillon pharyngé peut également être placé dans le même tube que l'écouvillon nasopharyngé.. 3. Extrait nasopharyngé ou extrait des voies respiratoires: Utiliser un collecteur connecté à une pompe à pression négative pour extraire le mucus du nasopharynx ou les sécrétions des voies respiratoires de la trachée. Insérez la tête collectrice dans la cavité nasale ou la trachée, allumer la pression négative, faites pivoter la tête du collecteur et sortez lentement, récupérer le mucus extrait, et rincez le collecteur une fois avec 3 ml de liquide d'échantillonnage (vous pouvez également utiliser un cathéter pédiatrique pour vous connecter à une seringue de 50 ml Collecteur alternatif).
4. Crachats profonds: Le patient doit recueillir les crachats toussés dans un tube en plastique à vis de 50 ml contenant 3 ml de solution échantillon après une toux profonde.. Si les crachats ne sont pas collectés dans la solution de prélèvement, ajoutez 2 à 3 ml de solution d'échantillonnage ou ajoutez un volume égal de solution de digestion des crachats avant le test.
Formule de solution de stockage de liquide digestif pour crachats:
Avant utilisation, diluer la solution mère pour 100 ml avec de l'eau déminéralisée. Tampon phosphate contenant 1 g/L de protéinase K peut également être liquéfié avec un volume égal d’expectorations.
5. Liquide de lavage bronchique: Insérez la tête collectrice dans la trachée (environ 30 cm de profondeur) de la narine ou de l'alvéole trachéale, injecter 5 ml de solution saline, allumer la pression négative, faites tourner la tête du collecteur et retirez-la lentement. Recueillir le mucus extrait et rincer le collecteur une fois avec le liquide de prélèvement (vous pouvez également utiliser un cathéter pédiatrique à connecter à une seringue de 50 ml pour remplacer le prélèvement).
6. Liquide de lavage alvéolaire: après une anesthésie locale, insérez le bronchoscope à fibre optique par la bouche ou le nez par le pharynx et insérez-le dans la branche du lobe moyen droit ou dans le segment de langue du poumon gauche, et insérer l'embout dans l'ouverture de la branche bronchique, et ajoutez lentement la physiologie de stérilisation à travers le trou de biopsie trachéale Eau salée, 30-50ml à chaque fois, la quantité totale est de 100 à 250 ml, ne doit pas dépasser 300 ml.
7. Échantillons fécaux: Prendre 1 ml de solution de traitement des échantillons, ramasser la taille de l'échantillon de soja et l'ajouter au tube, suce-le doucement pendant 3-5 fois, laissez-le reposer à température ambiante pendant 10 minutes, centrifuger à 8 000 tr/min pendant 5 minutes, et aspirez le surnageant pour la détection.
La solution de traitement des échantillons de selles peut être préparée par vous-même: 1.211 gTris, 8.5 g de chlorure de sodium, 1.1 g de chlorure de calcium anhydre ou 1.47 g de chlorure de calcium contenant de l'eau cristallisée, dissous dans 800 ml d'eau déminéralisée, et ajusté au pH 7.5 avec de l'acide chlorhydrique concentré , Compléter jusqu'à 1000 ml avec de l'eau déionisée.
Les suspensions de selles peuvent également être préparées en dissolvant des échantillons de selles à l’aide d’une solution de HANK ou d’une autre solution saline isotonique., solution de culture tissulaire ou tampon phosphate. Si le patient présente des symptômes de diarrhée, partir 3 pour 5 ml d'échantillon de selles, pipeter délicatement et mélanger, centrifuger à 8000 tr/min pour 5 minutes, et prélevez le surnageant pour l'utiliser.
8. Écouvillon anal: insérez doucement un coton-tige stérile dans l'anus de 3 à 5 cm, puis faites-le pivoter doucement et retirez-le, mettez-le immédiatement dans un tube d'échantillonnage à bouchon à vis externe de 15 ml contenant 3 à 5 ml de solution de conservation du virus, jeter la queue, et serrez le couvercle du tube.
9. Échantillons de sang: Il est recommandé d'utiliser des vaisseaux sanguins sous vide contenant un anticoagulant EDTA pour collecter 5 ml d'échantillons de sang.. Déterminer l'extraction d'acide nucléique avec du sang total ou du plasma selon le type de réactif d'extraction d'acide nucléique sélectionné. Pour séparer le plasma, centrifuger le sang total à 1 500-2 000 tr/min pendant 10 minutes et recueillir le surnageant dans un tube en plastique stérile à bouchon vissé.
10. Échantillon de sérum: Recueillir 5 ml d'échantillon de sang avec un tube de prélèvement sanguin à pression négative sous vide, laisser reposer à température ambiante pendant 30 minutes, centrifuger à 1 500 ～ 2 000 tr/min pendant 10 minutes, recueillir le sérum dans un tube en plastique stérile à bouchon vissé.
Autres matériaux: Collecter selon les exigences de conception.
(5) Emballage des spécimens
Après la collecte, il sera emballé dans l'enceinte de biosécurité du laboratoire secondaire de biosécurité.
1. Tous les échantillons doivent être placés dans un tube de prélèvement d'échantillons de taille appropriée avec un bouchon à vis et un joint résistant au gel., et resserré. Le numéro d'échantillon, taper, le nom et la date d'échantillonnage sont indiqués à l'extérieur du contenant.
2. Mettez les échantillons scellés dans un sac scellé, chaque sac est limité à un spécimen. Les exigences relatives à l'emballage des échantillons doivent répondre aux normes correspondantes dans le “Règles techniques pour la sécurité du transport aérien des marchandises dangereuses”.
3. Pour le transport d'échantillons externes, l'emballage à trois couches doit être effectué en fonction du type d'échantillons et de matières infectieuses de classe A ou B.
(6) Conservation des spécimens
Les échantillons utilisés pour l'isolement du virus et les tests d'acide nucléique doivent être testés dès que possible. Spécimens pouvant être détectés à l'intérieur 24 hours can be stored at 4°C; specimens that cannot be detected within 24 hours should be stored at -70°C or below (if not- Stored at 70℃, temporarily stored in the refrigerator at -20℃). Serum can be stored at 4°C for 3 jours, and below -20°C for long-term storage. Special warehouses or counters should be set up to preserve specimens separately. Avoid repeated freezing and thawing during specimen transportation.
(7) Specimens submitted for inspection
Specimens should be sent to the laboratory as soon as possible after collection. If long-distance transportation is required, it is recommended to use dry ice and other refrigeration methods for preservation.

Negative nucleic acid test results cannot rule out new coronavirus infection. Factors that may cause false negatives need to be excluded, y compris: poor sample quality, such as respiratory samples from the oropharynx, etc.; samples collected too early or too late; not properly stored and transported And processing of samples; reasons for the existence of the technology itself, such as viral mutation, PCR inhibition, etc.