PCR o reacción en cadena de la polimerasa, es una herramienta biotecnológica para amplificar un gen de interés. La PCR simple se utiliza para la detección y amplificación del gen.. Existen varios métodos avanzados de PCR, que se utilizan para diversos biotecnológicos, fines de diagnóstico e investigación. qPCR o PCR cuantitativa también se conoce como PCR en tiempo real. qPCR se utiliza para cuantificar los ácidos nucleicos. La amplificación de la molécula de ADN se puede monitorear durante la PCR, es decir. en tiempo real. La RT-PCR se conoce como reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa. Utiliza ambos procesos., es decir. transcripción inversa y reacción en cadena de la polimerasa. Se utiliza para detectar y medir la cantidad de ARN.
La gente a menudo confunde los términos PCR, RT PCR, y QPCR como el mismo. Pero no son lo mismo. Esto podría deberse a una infección asintomática., el principio central en los tres tipos sigue siendo el mismo. Antes de pasar a las diferencias de los tres PCR, debemos saber lo que son en realidad?
¿Qué es PCR??
La reacción en cadena de la polimerasa o PCR se usa para amplificar o producir múltiples copias de un gen o un tramo corto de ADN.. Fue inventado por Kary Mullis. Esta técnica es una herramienta muy útil en biología molecular y biotecnología.. Se utiliza en laboratorios para hacer miles de millones de copias de ADN para investigación y diagnóstico.. Hay tres pasos en PCR: desnaturalización, Primer recocido y Extensión de primers.
Requiere dos conjuntos de cebadores complementarios a ambos extremos de la plantilla de ADN y una polimerasa de ADN termoestable. El ciclo de la polimerasa se repite repetidamente para obtener múltiples copias del segmento de ADN..
Los tres pasos de la reacción en cadena de la polimerasa son:
desnaturalización: en este paso, el ADN de doble cadena se separa. Se forman hebras simples de ADN.
Recocido: La temperatura de reacción se reduce para permitir el apareamiento de bases complementarias y la hibridación del cebador..
Extensión: Taq polimerasa, que es una ADN polimerasa termoestable, se usa comúnmente para este propósito. La ADN polimerasa agrega nucleótidos al cebador y extiende la cadena complementaria en la dirección 5'-3'.
¿Qué es qPCR??
qPCR o PCR cuantitativa también se conoce como PCR en tiempo real. Da un análisis cuantitativo adicional del ADN o ARN en RT-qPCR.
En qPCR o PCR en tiempo real, Como el nombre sugiere, la amplificación se puede monitorear a medida que avanza la PCR. en qPCR, el etiquetado fluorescente permite la recopilación de datos en tiempo real a medida que se realiza una reacción en cadena de la polimerasa.
Los productos de PCR se pueden detectar en tiempo real en qPCR mediante dos métodos:
El uso de tintes fluorescentes no específicos ayuda a detectar ADN de doble cadena. El tinte de unión a dsDNA emite señales de fluorescencia a medida que se amplifica el ADN., y aumenta después de cada ciclo. La desventaja de este método es que solo se puede examinar un objetivo a la vez, ya que se une a todos los fragmentos de dsDNA..
Uso de sondas de ADN marcadas con fluorescencia, que son específicos de secuencia. Se pueden detectar tras la hibridación con su secuencia complementaria.. Dado que las sondas de ADN son específicas de la diana, muchos objetivos pueden ser analizados simultáneamente.
¿Qué es la RT-PCR??
RT-PCR o PCR de transcripción inversa consta de dos pasos, el primero es el proceso de transcripción inversa, y el segundo es la amplificación de la secuencia de ADN deseada por reacción en cadena de la polimerasa o PCR. RT-PCR se utiliza para detectar el ARN en una muestra. La cantidad de ARN se puede medir usando RT-qPCR. RT-PCR combinado con qPCR (RT-qPCR) es muy útil para hacer análisis cuantitativos de ARN viral y expresión génica.
Los pasos de la RT-PCR son los mismos que los de la PCR, con el primer paso adicional de transcripción inversa. En RT-PCR, ADN complementario (ADNc) se produce primero usando transcriptasa inversa (RT). el ADNc, así formado, luego se usa como plantilla para el proceso de amplificación estándar por PCR.
Diferencias clave entre PCR, RT PCR y qPCR:
El contenido anterior se puede resumir en base al siguiente punto:
- La PCR es una técnica sencilla que se utiliza para crear múltiples copias de los fragmentos de ADN deseados.. RT PCR, en la otra mano, se utiliza para la amplificación de ARN. De lo contrario, qPCR participa en la cuantificación de los ácidos nucleicos en la muestra respectiva.
- PCR y RT PCR son técnicas cualitativas, pero qPCR es una técnica cuantitativa.
- La plantilla inicial para PCR es ADN de doble cadena., mientras que RT PCR solo puede usar ARN como plantilla. Aparte de estos, qPCR tiene la capacidad de usar tanto ADN como ARN.
- La PCR es una técnica con baja sensibilidad y especificidad.. A diferencia de, RT PCR y qPCR son muy sensibles y específicas.
- La resolución del producto amplificado en PCR es ultrabaja. Por otro lado, los productos de PCR de RT PCR y qPCR tienen un mayor nivel de resolución.
- Solo se requiere la enzima ADN polimerasa para la PCR tradicional. Pero RT PCR y qPCR requieren enzimas transcriptasa inversa y ADN polimerasa..
- PCR, como RT PCR, no tiene relevancia para la fluorescencia, pero qPCR se basa principalmente en el principio de fluorescencia.
- Los resultados de PCR y RT-PCR se obtienen al final de la reacción, pero qPCR genera los resultados simultáneamente en forma de picos y gráficos.
