Ein Leitfaden zu Labortesttechniken für neue Coronavirus-Pneumonie

Ein Leitfaden zu Labortesttechniken für neue Coronavirus-Pneumonie
Im Februar 21, Die Nationale Gesundheitskommission hat einen neuen Plan zur Prävention und Bekämpfung von Coronavirus-Pneumonie herausgegeben (fünfte Auflage), und als Anhang, veröffentlichte neue technische Richtlinien für Labortests bei Coronavirus-Infektionen und Lungenentzündungen (fünfte Auflage).

Ein Leitfaden zu Labortesttechniken für neue Coronavirus-Pneumonie

Um die Seuchenkontrollabteilungen auf allen Ebenen und andere relevante Institutionen anzuleiten, Labortests auf neue Coronavirus-Pneumonie durchzuführen, Dieser technische Leitfaden ist speziell formuliert.
1. Probenentnahme und -verarbeitung
1. Nasopharyngeale Abstriche: Der Probenehmer stützt sanft den Kopf der zu entnehmenden Person, hält den Tupfer in einer Hand, Der Tupfer wird am Nasenloch befestigt, und vertieft sich langsam nach hinten entlang der Unterseite des unteren Nasenkanals. Heftig, um Blutungen aufgrund eines Traumas zu vermeiden. Wenn die Spitze des Tupfers die hintere Wand der Nasopharynxhöhle erreicht, Drehen Sie es eine Woche lang vorsichtig (bei Reflexhusten, es sollte eine Weile bleiben), Nehmen Sie dann langsam den Tupfer heraus, und tauchen Sie den Tupferkopf in die Konservierungslösung 2 zu 3 ml Virus (ebenfalls erhältlich. Verwenden Sie isotonische Kochsalzlösung, Gewebekulturlösung oder Phosphatpufferlösung), den Schwanz wegwerfen, und die Kappe festziehen.
2. Rachenabstrich: Die gesammelte Person gurgelt zunächst mit physiologischer Kochsalzlösung, Die Probenahmeperson legt den Tupfer in sterile normale Kochsalzlösung, um ihn zu befeuchten (Es ist verboten, den Tupfer in die Viruskonservierungslösung zu legen, um eine durch Antibiotika verursachte Allergie zu vermeiden), der Kopf der versammelten Person ist leicht nach oben geneigt, der Mund weitete sich, mit „Ah“ Geräusche, Freilegen der Rachenmandeln auf beiden Seiten, den Tupfer über den Zungengrund, und das Abwischen der Rachenmandeln auf beiden Seiten des Subjekts mit zumindest ein wenig kräftigem Hin und Her 3 mal, und dann zumindest 3 an der Rückwand des Pharynx Zweiter, Tauchen Sie den Tupferkopf in ein Röhrchen mit 2 zu 3 ml Virenkonservierungslösung (isotonische Kochsalzlösung, Es können auch Gewebekulturlösung oder Phosphatpufferlösung verwendet werden), den Schwanz wegwerfen, und die Kappe festziehen. Der Rachenabstrich kann auch in das gleiche Röhrchen gegeben werden wie der Nasopharyngealabstrich. 3. Nasopharyngealextrakt oder Atemwegsextrakt: Verwenden Sie einen an eine Unterdruckpumpe angeschlossenen Kollektor, um Schleim aus dem Nasopharynx oder Atemwegssekrete aus der Luftröhre zu extrahieren. Führen Sie den Sammelkopf in die Nasenhöhle oder Luftröhre ein, schalten Sie den Unterdruck ein, Drehen Sie den Kollektorkopf und verlassen Sie ihn langsam, Sammeln Sie den abgesaugten Schleim, und spülen Sie den Kollektor einmal mit 3 ml Probenflüssigkeit (Sie können auch einen pädiatrischen Katheter verwenden, um ihn an eine 50-ml-Spritze als alternativen Sammelbehälter anzuschließen).
4. Tiefer Auswurf: Nach starkem Husten muss der Patient den ausgehusteten Auswurf in einem 50-ml-Kunststoffröhrchen mit Schraubverschluss auffangen, das 3 ml der Probenlösung enthält. Wenn das Sputum nicht in der Probenahmelösung gesammelt wird, Geben Sie vor dem Test 2 bis 3 ml der Probenlösung hinzu oder fügen Sie ein gleiches Volumen der Sputum-Verdauungslösung hinzu.
Formel zur Lagerung von Sputum-Verdauungsflüssigkeit:
Vor Gebrauch, Verdünnen Sie die Stammlösung auf 100 ml mit entionisiertem Wasser. Phosphatpuffer enthaltend 1 g/L Proteinase K kann auch mit einem gleichen Sputumvolumen verflüssigt werden.
5. Bronchialspülflüssigkeit: Führen Sie den Sammelkopf in die Luftröhre ein (etwa 30 cm tief) aus dem Nasenloch oder der Luftröhrenhöhle, 5 ml Kochsalzlösung injizieren, schalten Sie den Unterdruck ein, Drehen Sie den Sammelkopf und ziehen Sie ihn langsam heraus. Sammeln Sie den abgesaugten Schleim und spülen Sie den Auffangbehälter einmal mit der Probenflüssigkeit aus (Sie können auch einen Kinderkatheter verwenden, um ihn an eine 50-ml-Spritze anzuschließen, um die Sammlung zu ersetzen).
6. Alveoläre Spülflüssigkeit: nach örtlicher Betäubung, Führen Sie das faseroptische Bronchoskop durch den Mund oder die Nase durch den Rachenraum ein und führen Sie es in den Zweig des rechten Mittellappens oder des linken Lungenzungensegments ein, und stecken Sie die Spitze in die Öffnung des Bronchialasts, und fügen Sie langsam das sterilisierte Salzwasser durch das Trachealbiopsieloch hinzu, 30-50jedes Mal ml, die Gesamtmenge beträgt 100-250ml, sollte 300 ml nicht überschreiten.
7. Stuhlproben: Nehmen Sie 1 ml der Probenverarbeitungslösung, Nehmen Sie die Sojabohnen-Probengröße und geben Sie sie in das Röhrchen, Saugen Sie sanft daran 3-5 mal, Lassen Sie es bei Raumtemperatur stehen 10 Protokoll, Zentrifuge bei 8000 U/min für 5 Protokoll, und saugen Sie den Überstand zum Nachweis ab.
Die Behandlungslösung für Stuhlproben kann selbst hergestellt werden: 1.211 g Tris, 8.5 g Natriumchlorid, 1.1 g wasserfreies Calciumchlorid oder 1.47 g Calciumchlorid mit Kristallwasser, aufgelöst in 800 ml entionisiertes Wasser, und auf pH eingestellt 7.5 mit konzentrierter Salzsäure , Mit entionisiertem Wasser auf 1000 ml auffüllen.
Stuhlsuspensionen können auch durch Auflösen von Stuhlproben mit HANK’S-Lösung oder einer anderen isotonischen Kochsalzlösung hergestellt werden, Gewebekulturlösung oder Phosphatpuffer. Wenn der Patient Durchfallsymptome hat, verlassen 3 zu 5 ml der Stuhlprobe, Vorsichtig pipettieren und mischen, Zentrifuge bei 8000 U/min für 5 Protokoll, und entnehmen Sie den Überstand zur Verwendung.
8. Analabstrich: Führen Sie vorsichtig ein steriles Wattestäbchen 3 bis 5 cm in den Anus ein, Drehen Sie es dann vorsichtig und ziehen Sie es heraus, Geben Sie es sofort in ein 15-ml-Probenröhrchen mit Schraubverschluss und 3 bis 5 ml Virenkonservierungslösung, den Schwanz wegwerfen, und ziehen Sie die Rohrabdeckung fest.
9. Blutproben: Es wird empfohlen, Vakuumblutgefäße mit dem Antikoagulans EDTA zu verwenden, um 5 ml Blutproben zu entnehmen. Bestimmen Sie die Nukleinsäureextraktion mit Vollblut oder Plasma entsprechend der Art des ausgewählten Nukleinsäureextraktionsreagenzes. Plasma trennen, Zentrifugieren Sie das Vollblut bei 1500–2000 U/min 10 Minuten und sammeln Sie den Überstand in einem sterilen Kunststoffröhrchen mit Schraubverschluss.
10. Serumprobe: Entnehmen Sie 5 ml Blutprobe mit einem Vakuum-Unterdruck-Blutentnahmeröhrchen, bei Zimmertemperatur stehen lassen 30 Protokoll, Zentrifuge bei 1500–2000 U/min für 10 Protokoll, Sammeln Sie das Serum in einem sterilen Kunststoffröhrchen mit Schraubverschluss.
Andere Materialien: Sammeln Sie entsprechend den Designanforderungen.
(5) Verpackung von Proben
Nach der Sammlung, Es wird im Biosicherheitsschrank des Sekundärlabors für Biosicherheit verpackt.
1. Alle Proben sollten in ein Probensammelröhrchen geeigneter Größe mit Schraubdeckel und gefrierbeständiger Dichtung gegeben werden, und festgezogen. Die Probennummer, Typ, Name und Probenahmedatum sind auf der Außenseite des Behälters angegeben.
2. Legen Sie die versiegelten Proben in einen versiegelten Beutel, Jede Tasche ist auf ein Exemplar beschränkt. Die Anforderungen an die Probenverpackung müssen den entsprechenden Standards in entsprechen „Technische Regeln für die sichere Beförderung gefährlicher Güter im Luftverkehr“.
3. Für den Transport externer Proben, Die dreischichtige Verpackung erfolgt entsprechend der Art der Proben und infektiösen Stoffe der Klasse A oder B.
(6) Konservierung von Exemplaren
Proben, die für die Virusisolierung und Nukleinsäuretests verwendet werden, sollten so schnell wie möglich getestet werden. Exemplare, die darin nachgewiesen werden können 24 Stunden können bei 4°C gelagert werden; Exemplare, die im Inneren nicht nachweisbar sind 24 Stunden sollten bei -70°C oder darunter gelagert werden (wenn nicht- Bei 70℃ gelagert, vorübergehend im Kühlschrank bei -20℃ gelagert). Serum kann bei 4°C gelagert werden 3 Tage, und unter -20°C für die Langzeitlagerung. Zur getrennten Aufbewahrung von Exemplaren sollten spezielle Lager oder Theken eingerichtet werden. Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren und Auftauen während des Probentransports.
(7) Zur Prüfung eingereichte Proben
Die Proben sollten so schnell wie möglich nach der Entnahme an das Labor geschickt werden. Wenn ein Ferntransport erforderlich ist, Es wird empfohlen, zur Konservierung Trockeneis und andere Kühlmethoden zu verwenden.

Ein negatives Nukleinsäuretestergebnis kann eine Neuinfektion mit dem Coronavirus nicht ausschließen. Faktoren, die zu falsch-negativen Ergebnissen führen können, müssen ausgeschlossen werden, einschließlich: schlechte Probenqualität, wie Atemwegsproben aus dem Oropharynx, etc.; Proben wurden zu früh oder zu spät entnommen; unsachgemäße Lagerung und Transport sowie Verarbeitung von Proben; Gründe für die Existenz der Technologie selbst, wie zum Beispiel eine Virusmutation, PCR-Hemmung, etc.